磁珠是發(fā)展起來的一項新的免疫學技術(shù),它將固化試劑*的優(yōu)點與免疫學反應(yīng)的高度特異性結(jié)合于一體,以免疫學為基礎(chǔ),滲透到病理、生理、藥理、微生物、生化以及分子遺傳學等各個領(lǐng)域,其在免疫檢測、細胞分離、生物大分子純化和分子生物學等方面得到了越來越廣泛的應(yīng)用。
技術(shù)應(yīng)用:
用MACS 細胞分選系統(tǒng)可以分離出非常純的細胞群體,而且有較好的回收率和存活率。依據(jù)細胞頻率和標記表達水平的不同,MACS分離細胞的純度可達95%-99.9%,回收率>90%。
分離原理:
免疫磁珠法分離細胞是基于細胞表面抗原能與連接有磁珠的特異性單抗相結(jié)合,在外加磁場中,通過抗體與磁珠相連的細胞被吸附而滯留在磁場中,無該種表面抗原的細胞由于不能與連接著磁珠的特異性單抗結(jié)合而沒有磁性,不在磁場中停留,從而使細胞得以分離。
應(yīng)用方法:
免疫磁珠應(yīng)用分為正選法和負選法:
正選法-磁珠結(jié)合的細胞就是所要分離獲得的細胞;
負選法-磁珠結(jié)合不需要的細胞,游離于上清液的細胞為所需細胞;
一般而言,負選法比正選法的磁珠用量大。
磁珠大小在0.1-0.45mm 包被了生產(chǎn)的高質(zhì)量單抗磁珠已為白細胞亞群的分選所優(yōu)化 將包被了特異性單抗的BD IMag磁珠加入細胞懸液,磁珠特異性地與有相應(yīng)抗原的細胞亞群結(jié)合,通過分離得到的連有磁珠的細胞可直接用于功能試驗和用流式細胞儀檢測。
磁分離細胞的重要指標是:
純度和得率,這取決于磁珠所連接單抗的特異性和磁珠大?。ù判裕?,然而太小的磁珠得率不高,太大的磁珠又會影響細胞活性,也無法直接上流式。