一区二区三区四区精品日韩-久久91久久久久麻豆精品-人妻佐知子中文字幕在线-欧美日一区二区在线观看

　　轉(zhuǎn)染試劑是一種非脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑，廣泛適用于轉(zhuǎn)染各種細(xì)胞系，且細(xì)胞毒性非常低。由于使用該轉(zhuǎn)染試劑轉(zhuǎn)染時(shí)不要求去除血清或培養(yǎng)液，并且轉(zhuǎn)染后也不要求換液去除，因而使用起來(lái)非常方便。
 

　　轉(zhuǎn)染試劑瞬時(shí)轉(zhuǎn)染方法：
 

　　1. 接種細(xì)胞：轉(zhuǎn)染前一天，用膠原酶消化細(xì)胞并計(jì)數(shù)。調(diào)整細(xì)胞濃度，將細(xì)胞鋪入細(xì)胞培養(yǎng)的器皿，每個(gè)孔置入的細(xì)胞量應(yīng)能使轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞匯合度達(dá)到 70~80%。
 

　　2. 準(zhǔn)備 DNA-PEI 復(fù)合物： DNA、EZ Trans 試劑和稀釋劑在進(jìn)行以下步驟前需先使其升至室溫。依據(jù)下表所示，用 Opti-MEM ITM(Invitrogen)或其他適合的無(wú)蛋白培養(yǎng)基稀釋適量 DNA。用同樣的培養(yǎng)基稀釋EZ Trans 試劑。每 1 μg DNA 需用2-5 μL EZ Trans轉(zhuǎn)染試劑。一邊輕輕渦旋裝有 DNA 溶液的試管，一邊將稀釋的EZ Trans轉(zhuǎn)染試劑滴加至試管中(注意：請(qǐng)勿顛倒添加順序)。充分混勻后，室溫靜置 10~25 min 以形成DNA-PEI復(fù)合物。當(dāng)溶液體積較大時(shí)，請(qǐng)用圓底聚丙烯管，例如 Falcon 5 mL /14 mL 離心管。
 

　　3. 轉(zhuǎn)染細(xì)胞：直接向每個(gè)孔中加入 DNA-PEI復(fù)合物并輕輕渦旋培養(yǎng)板/培養(yǎng)皿。在無(wú)血清條件下轉(zhuǎn)染時(shí)，去除生長(zhǎng)培養(yǎng)基，替換成無(wú)血清培養(yǎng)基，然后滴DNA-PEI復(fù)合物。轉(zhuǎn)染 3 h 后，添加1/2體積的包含 30%血清的生長(zhǎng)培養(yǎng)基。
 

　　4. 孵育細(xì)胞和分析結(jié)果：在 CO2培養(yǎng)箱中 37℃下孵育細(xì)胞至可以分析檢測(cè)。轉(zhuǎn)染后zui快 7h 即可檢測(cè)到轉(zhuǎn)入基因的表達(dá)。請(qǐng)自行確定檢測(cè)時(shí)間。
 

　　轉(zhuǎn)染試劑的使用注意事項(xiàng)：
 

　　轉(zhuǎn)染前須保證FuGENE® 6溫度已經(jīng)達(dá)到室溫，使用前須上下顛倒數(shù)次進(jìn)行簡(jiǎn)單混勻。建議使用標(biāo)準(zhǔn)的24孔板作為FuGENE® 6轉(zhuǎn)染試劑的支架。請(qǐng)不要將原瓶中的FuGENE® 6進(jìn)行分裝。盡可能減少FuGENE® 6原液與塑料制品的表面接觸。不要使用硅化的槍頭或離心管。在稀釋FuGENE® 6時(shí)，請(qǐng)務(wù)必保證將FuGENE® 6直接混入培養(yǎng)基，而不要接觸到離心管。