Phleomycin腐草霉素 (抗生素)
產(chǎn)品簡(jiǎn)介:
產(chǎn)品貨號(hào) | 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 報(bào)價(jià)(元) |
FS0017-1ML | Phleomycin (20mg/ml) 腐草霉素(20 mg/ml) | 1ml | 900.00 |
FS0017-5ML | Phleomycin (20mg/ml) 腐草霉素(20 mg/ml) | 5×1ml | 3400.00 |
腐草霉素是分子遺傳學(xué)研究中的選擇性抗生素之一,可用于篩選攜帶Sh ble基因的轉(zhuǎn)染細(xì)胞。Sh ble基因來(lái)源于Streptoalloteichus hindustanus,其可編碼一種14kDa的蛋白,該蛋白可與腐草霉素強(qiáng)烈結(jié)合從而抑制其切割DNA鏈的活性。腐草霉素是由多種結(jié)構(gòu)類(lèi)似物構(gòu)成的復(fù)合物,這些復(fù)合物僅僅在末端胺基有所差異。另外,因?qū)儆阢~離子螯合的復(fù)合物,溶液呈藍(lán)色。
本品以20mg/ml的無(wú)菌溶液形式提供,可直接用于細(xì)胞培養(yǎng),在0.1-50μg/ml濃度范圍內(nèi),腐草霉素可以抑制大多數(shù)好氧細(xì)胞的生長(zhǎng)。
產(chǎn)品屬性 Phleomycin腐草霉素(抗生素)
CAS號(hào)(CAS NO.) | 11006-33-0 |
分子式(Formula) | C55H85O21N20S2Cu•HCl |
分子量(Molecular weight) | 1525 |
純度(Purity) | >90%(HLPC) |
結(jié)構(gòu)式(Structure) |
運(yùn)輸與保存方法
冰袋運(yùn)輸。
4°C或-20°C保存。4°C穩(wěn)定保存12個(gè)月,-20°C可穩(wěn)定保存18個(gè)月。避免反復(fù)凍融。
Phleomycin腐草霉素(抗生素)操作方法
【注1】細(xì)胞對(duì)腐草霉素的敏感性受pH值影響,如pH值越高,敏感性越高;另外,對(duì)于高滲透壓培養(yǎng)基如原生質(zhì)體再生用的培養(yǎng)基,腐草霉素的活性會(huì)明顯降低2-3倍。因此也可能通過(guò)使用低鹽培養(yǎng)基來(lái)降低腐草霉素使用量。
【注2】使用前需將低溫存放的腐草霉素置于室溫回溫,之后低速充分混勻。
1大腸桿菌
攜帶bleomycin抗性基因如Sh ble,Tn5的質(zhì)粒,一旦轉(zhuǎn)化進(jìn)入大腸桿菌受體菌如HB101, DH5a, MC1061,賦予其腐草霉素抗性。
腐草霉素抗性的轉(zhuǎn)化子可以在添加5 μg/ml Phleomycin的低鹽LB瓊脂培養(yǎng)基(Yeast extract 5g/L, Tryptone 10g/L, NaCl 5g/L, Agar 15 g/L, pH 7.5)中進(jìn)行篩選。加有腐草霉素的平板可于4℃穩(wěn)定保存1個(gè)月。
2酵母菌
釀酒酵母的腐草霉素抗性轉(zhuǎn)化子可在添加10 μg/ml Phleomycin的YEPD培養(yǎng)基中進(jìn)行篩選。
操作步驟:按常規(guī)方法進(jìn)行酵母細(xì)胞轉(zhuǎn)化,一旦DNA進(jìn)入細(xì)胞后,用YEPD培養(yǎng)基稀釋細(xì)胞并置于搖床上培養(yǎng)6h或過(guò)夜,使其抗性性狀得以表達(dá)。之后將細(xì)胞冰浴1h并涂布培養(yǎng)在添加10 μg/ml Phleomycin的YEPD(pH 7.0)固體培養(yǎng)基上。
3真菌
根據(jù)轉(zhuǎn)化子對(duì)Phleomycin 的敏感性不同,在添加有10-50 μg/ml腐草霉素的再生培養(yǎng)基內(nèi)進(jìn)行篩選。先將細(xì)胞在4℃孵育過(guò)夜然后置于生長(zhǎng)溫度培養(yǎng),可提高其對(duì)抗生素的敏感性。
4 植物細(xì)胞
根據(jù)植物類(lèi)型不同,選擇5-25 μg/ml Phleomycin進(jìn)行轉(zhuǎn)化子篩選。
5 哺乳動(dòng)物細(xì)胞
5-50 μg/ml Phleomycin,推薦先通過(guò)建立滅殺曲線來(lái)確定濃度。與G418做比較,可能需要更長(zhǎng)的時(shí)間來(lái)殺死細(xì)胞或者使細(xì)胞從平板上脫落,尤其當(dāng)細(xì)胞處于高密度的情況。
依細(xì)胞系不同,通常需要5~21天來(lái)挑選具腐草霉素抗性的穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞。
注意事項(xiàng):
1)腐草霉素對(duì)濃酸較為敏感,但可短時(shí)間暴露于稀酸中。使用前將本品回溫至室溫,并輕輕混勻。
2)腐草霉素有毒,避免直接接觸皮膚,不可吞服。酸性或堿性pH,或次磷酸鈉中會(huì)即刻失效。
3)為了您的安全和健康,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。