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FSQ-101東洋紡TOYOBO ReverTra Ace qPCR RT Kit Realtime PCR用cDNA合成試劑盒  

產(chǎn)品介紹：

適用于合成Realtime PCR用cDNA的逆轉(zhuǎn)錄試劑盒。

本試劑盒是適用于Realtime PCR用cDNA制作的逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)試劑盒。由于采用了本公司
高性能逆轉(zhuǎn)錄酶『ReverTra Ace』，反應(yīng)效率非常出色。另外，通過(guò)改良，使得帶入到
Realtime PCR反應(yīng)體系中的逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)液的影響降到小，即使在PCR反應(yīng)體系中添加
了多至20％體積的逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)液，也能表現(xiàn)出良好的反應(yīng)曲線，因此，適合用于表達(dá)量
較少的mRNA的高靈敏度測(cè)試。由于精簡(jiǎn)了試劑盒的構(gòu)成，可非常簡(jiǎn)便地進(jìn)行操作，僅需
約15分鐘的逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，即可得到充分的cDNA。

特征1. 超群的cDNA合成效率
由于使用了恰當(dāng)比例的mix primer（oligo dT和Random primer）、以及經(jīng)改良的反應(yīng)緩沖液，可實(shí)現(xiàn)高效率的逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)。

特征2. 反應(yīng)時(shí)間僅需15分鐘
逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)僅需15分鐘即可完成。此外，即便是要除去對(duì)Realtime PCR反應(yīng)有阻礙的殘留的模板RNA，也無(wú)須追加RNase H處理。
特征3. 提高了和Realtime PCR試劑的適應(yīng)性
通過(guò)改良，使帶入到Realtime PCR反應(yīng)體系的逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)液的影響降到小。即使在PCR反應(yīng)體系中添加了多至20% (V/V)的逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)液，也能表現(xiàn)出良好的反應(yīng)曲線。因此，適合用于表達(dá)量較少的mRNA的高靈敏度檢測(cè)。

FSQ-101東洋紡TOYOBO ReverTra Ace qPCR RT Kit Realtime PCR用cDNA合成試劑盒 

規(guī)格參數(shù)Specifications

實(shí)驗(yàn)例1 與用其他公司產(chǎn)品cDNA合成量的比較

以來(lái)源于HeLa細(xì)胞的total RNA 100ng為模板，根據(jù)各公司試劑盒推薦的條件進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)。然后，在Realtime PCR反應(yīng)液(使用本公司SYBR Green Realtime PCR Master Mix)中分別添加上述的逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)液各1% (V/V)，用Realtime PCR對(duì)β-Actin和Polymerase ε的cDNA量進(jìn)行定量。結(jié)果可見(jiàn)，在使用本試劑盒的情況下，兩個(gè)目的片段都有high的收量。 

 實(shí)驗(yàn)例2 RNase H處理與否對(duì)檢測(cè)靈敏度影響的比較

以來(lái)源于HeLa細(xì)胞的total RNA 100ng為模板，使用ReverTra Ace qPCR RT Kit（藍(lán)線）及另外添附RNase H的B公司cDNA合成試劑盒，按各自推薦的實(shí)驗(yàn)步驟進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)(B公司試劑盒分別按RNase H處理（紅線）/未處理（橙線）兩種方法進(jìn)行)。然后，按和實(shí)驗(yàn)例1同樣的方法檢測(cè)β-Actin的擴(kuò)增效果。結(jié)果顯示，用B公司的試劑盒RNase H未處理（橙線）的情況下，檢測(cè)效果大幅下降。而用ReverTra Ace qPCR RT Kit（藍(lán)線）進(jìn)行反應(yīng)，即便不追加RNase H處理也能顯示出很高的擴(kuò)增效率。已經(jīng)過(guò)實(shí)驗(yàn)證明，用本試劑盒的情況下，RNase H處理與否靈敏度相等。
※本試劑盒不包含RNase H處理步驟。

實(shí)驗(yàn)例3 模板RNA量的添加量對(duì)合成效率影響的探討

在ReverTra Ace qPCR RT Kit的反應(yīng)體系(10μl)中，分別添加HeLa細(xì)胞由來(lái)的total RNA 0.5μg - 0.5pg，分別進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)。然后，采用和實(shí)驗(yàn)例2同樣的方法擴(kuò)增β-Actin基因。結(jié)果可見(jiàn)，在探討的范圍內(nèi)，模板RNA的量和cDNA的收量密切相關(guān)，但無(wú)論模板RNA量的多寡，仍可維持很高的cDNA合成效率。由此可見(jiàn)，在目的片段濃度有差異的樣品之間，逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)效率的變化并不大，因此可將定量結(jié)果的誤差控制在小范圍內(nèi)。

簡(jiǎn)要備注

Q1. 雖然反應(yīng)時(shí)間僅需15分鐘，但如果延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間，是否可提高cDNA的合成量？
A1. 要對(duì)tRNA等高表達(dá)量的RNA進(jìn)行*逆轉(zhuǎn)錄時(shí)，延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間可提高合成量，但一般情況下按照標(biāo)準(zhǔn)的推薦條件37℃15分鐘即可。
Q2. 可使用哪些模板RNA?  
 A2. Total RNA、mRNA、tRNA、rRNA等各種RNA都可以使用。
Q.3 需要進(jìn)行RNase H處理嗎?  
 A3. 由于殘留的模板RNA會(huì)阻礙PCR反應(yīng)，所以一般情況下逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)結(jié)束后都要通過(guò)RNase H分解模板RNA。但本試劑盒運(yùn)用本公司開(kāi)發(fā)的新系統(tǒng)，在逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)后可用非酶性方法除去模板RNA。因此，逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)后無(wú)需RNase H處理。

 參考文獻(xiàn)

1）K.Miyazaki et al.,J.Bacteriology.,185:2219−2226（2003）
2）A.Nezu et al.,Biochem.J.,263:59−66（2002）
3）S.Nakashima et al.,J.Biochem.(Tokyo),131:241−246（2002）
4）S.Atsumi et al.,EMBO J.,20:5453−5460（2001）
5）Y.Yabuta et al.,Plant Cell Physiol.,41:666−675（2000）
6）S.Lee et al.,Gene,245:253−266（2000）

價(jià)格表

*反應(yīng)體系為10μl時(shí)的反應(yīng)次數(shù)。

TOYOBO原裝PCR用cDNA合成試劑盒FSQ-101 TOYOBO原裝PCR用cDNA合成試劑盒FSQ-101