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X-Gal 5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-吡喃半乳糖苷

產(chǎn)品信息

產(chǎn)品描述
  X-Gal,英文全名5-Bromo-4-chloro-3-indoxyl-beta-D-galactopyranoside ,中文全名5溴-4-氣-3-吲哚B-D-吡喃半乳糖苷, CAS NO: 7240-90-6,郢半乳糖苷酶(B-gal，beta-gal )的組織化學(xué)顯色底物，能被水解生成半孚糖和5溴4-氣-3羥基吲哚。5-溴 -4-氣3-羥基吲哚是一種可溶、無色的吲哚水解產(chǎn)物，隨后通過二聚合和氧化反應(yīng),被轉(zhuǎn)化為- -不可溶藍(lán)色產(chǎn)物-5,5'二溴-4,4' -二氣靛藍(lán)。
  X-Ga|是分子生物克隆實(shí)驗(yàn)中用來檢測(cè)B-gal活性的一種主流試劑，可用來檢測(cè)外源DNA是否插入質(zhì)粒DNA的lacZ區(qū)。當(dāng)外源DNA成功插入lacZ區(qū),會(huì)破壞B-gal的a-互補(bǔ),導(dǎo)致其活性喪失,則無法水解X-Gal使得菌落呈白色。而保留-gal正常活性的**能產(chǎn)生藍(lán)色菌落。許多其它應(yīng)用也常將X-Gal用作底物來檢測(cè)-gal活性，這些應(yīng)用包括: 1) B-gal-抗體連接的免疫分析和免疫組化;2)基于-gal誘導(dǎo)的大腸桿菌噬菌體檢測(cè); 3)腫瘤進(jìn)展微轉(zhuǎn)移形成的檢測(cè)。
  X-Ga|常常與IPTG(貨號(hào): FS0373 )聯(lián)合使用進(jìn)行藍(lán)白斑克隆篩選。本品達(dá)分子生物學(xué)級(jí)別。

產(chǎn)品使用方法

1. X-Gal儲(chǔ)存液配制：
稱取0.2g X-Ga|裝入15m|離心管,加入10ml DMF ,鹿蕩使其充分溶解。按照1m/管分裝,并用鋁箔紙包裹離心管使其避光，置于-20C凍存，正常情況下6-12個(gè)月穩(wěn)定。
2. IPTG儲(chǔ)存液配制：
 稱取0.238gIPTG溶于10ml去離子水中,充分溶解混勻后,經(jīng)0.22um濾膜過濾**,即得到100mM ( 100x )的儲(chǔ)存液。按照1m/管分裝,置置于-20*C凍存，高達(dá)一年穩(wěn)定。
3.藍(lán)白斑篩選方法
X-Gal常與IPTG聯(lián)合使用進(jìn)行藍(lán)白斑克隆篩選。
方法1: X-Gal. IPTG加入固體培養(yǎng)基(推薦)
1)高壓**已加瓊脂的培養(yǎng)基，并冷卻到50C左右;
2)每m|培養(yǎng)基內(nèi)加入10ul 20mg/ml X-gal溶液、10ul 100mM IPTG (使其終濃度達(dá)到1mM) ;3)加入適量篩選***如氨芐青霉素，卡那霉素，羧芐青霉素等;4)混勻后倒板，置于無菌超凈臺(tái)內(nèi)使培養(yǎng)基凝固(通常需要30min)。[注意] : 藍(lán)白斑篩選用的平板請(qǐng)置于4C避光保存, 1周穩(wěn)定。
5)將轉(zhuǎn)化的感受態(tài)細(xì)胞涂布到上述平臺(tái),于379C倒置培養(yǎng)過夜,觀察藍(lán)白斑情況。
方法2: X-Gal. IPTG直接涂布平板表面1)于無菌超凈臺(tái)內(nèi)干燥倒好的平板;
2)加120ul 20mg/ml X-gal溶液、40pl 100mM IPTG到平板表面,并涂布均勻夏蓋整個(gè)平板;3)于無菌超凈臺(tái)內(nèi)干燥上述平板，至少需要30min;
4)將轉(zhuǎn)化的感受態(tài)細(xì)胞涂布到上述平臺(tái)，于379C倒置培養(yǎng)過夜,觀察藍(lán)白斑情況。

1. X-Gal儲(chǔ)存液配制：
稱取0.2g X-Ga|裝入15m|離心管,加入10ml DMF ,鹿蕩使其充分溶解。按照1m/管分裝,并用鋁箔紙包裹離心管使其避光，置于-20C凍存，正常情況下6-12個(gè)月穩(wěn)定。
2. IPTG儲(chǔ)存液配制：
 稱取0.238gIPTG溶于10ml去離子水中,充分溶解混勻后,經(jīng)0.22um濾膜過濾**,即得到100mM ( 100x )的儲(chǔ)存液。按照1m/管分裝,置置于-20*C凍存，高達(dá)一年穩(wěn)定。
3.藍(lán)白斑篩選方法
X-Gal常與IPTG聯(lián)合使用進(jìn)行藍(lán)白斑克隆篩選。
方法1: X-Gal. IPTG加入固體培養(yǎng)基(推薦)
1)高壓**已加瓊脂的培養(yǎng)基，并冷卻到50C左右;
2)每m|培養(yǎng)基內(nèi)加入10ul 20mg/ml X-gal溶液、10ul 100mM IPTG (使其終濃度達(dá)到1mM) ;3)加入適量篩選***如氨芐青霉素，卡那霉素，羧芐青霉素等;4)混勻后倒板，置于無菌超凈臺(tái)內(nèi)使培養(yǎng)基凝固(通常需要30min)。[注意] : 藍(lán)白斑篩選用的平板請(qǐng)置于4C避光保存, 1周穩(wěn)定。
5)將轉(zhuǎn)化的感受態(tài)細(xì)胞涂布到上述平臺(tái),于379C倒置培養(yǎng)過夜,觀察藍(lán)白斑情況。
方法2: X-Gal. IPTG直接涂布平板表面1)于無菌超凈臺(tái)內(nèi)干燥倒好的平板;
2)加120ul 20mg/ml X-gal溶液、40pl 100mM IPTG到平板表面,并涂布均勻夏蓋整個(gè)平板;3)于無菌超凈臺(tái)內(nèi)干燥上述平板，至少需要30min;
4)將轉(zhuǎn)化的感受態(tài)細(xì)胞涂布到上述平臺(tái)，于379C倒置培養(yǎng)過夜,觀察藍(lán)白斑情況。

產(chǎn)品屬性

CAS號(hào)： 7240-90-6

別名： 5-溴-4氯-3-吲哚基-β-D-半乳糖苷；5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷

英文名稱： X-gal；BCIG；5-Bromo-4-chloro-3-indolyl-β-D-galactoside

分子式： C14H15BrClNO6

分子量： 408.63

純度：≥99.0%

Specific Rotation (0.1%, 50% DMF)：-60～-63°

性狀：白色或淡黃色粉末 

儲(chǔ)存條件：-20°C

注意事項(xiàng)
1)為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
2)用途：本品僅供科研，不得用于其它用途。(以下用途僅供參考)X-Gal是β-半乳糖苷酶(β-galactosidase)的顯色底物，在β-半乳糖苷酶的催化下會(huì)產(chǎn)生藍(lán)色產(chǎn)物。常用于β-半乳糖苷酶的原位染色檢測(cè)以及藍(lán)白斑篩選。

3)X-gal優(yōu)選溶劑為DMF。若使用DMSO作為溶劑，選擇相對(duì)新鮮且高質(zhì)量的DMSO極為重要,持續(xù)性的研究發(fā)現(xiàn)由于使用舊或低質(zhì)量DMSO造成很多問題。建議大部分實(shí)驗(yàn)都用DMF作為溶劑

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